La ligation de l'ADN
La ligation de l'ADN est un processus qui joint de manière covalente le squelette phosphate de l'ADN double brin. Elle est réalisée par une enzyme appelée ADN ligase.
La réaction de ligation se compose généralement de deux étapes :
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La collision des extrémités de l'ADN. Cette collision se produit par hasard et le taux d'occurrence est plus faible à basse température. Les basses températures stabilisent la liaison hydrogène entre les nucléotides complémentaires. L'ADN ligase atteint son activité optimale à 25o. Une règle générale est que plus la température d'incubation est basse, plus le temps d'incubation est long.
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Réaction enzymatique. L'ADN ligase catalyse la jonction entre le 3'-hydroxyle et le 5'-phosphate.
Figure 1 : Le nucléotide AMP est transféré au 5'-phosphate. Puis la liaison AMP-phosphate est attaquée par 3'-OH formant une liaison covalente tout en libérant de l'AMP.