Le gating

Le gating est le processus de sélection des cellules cibles à trier en appliquant la charge correcte aux gouttelettes afin de les envoyer vers les tubes de collecte après être passées par les plaques de déviation. Les gates peuvent être définies en fonction des valeurs FSC/SSC ou de l'intensité de la fluorescence.

La première stratégie de gating la plus courante consiste à utiliser le FSC et le SSC pour trouver des événements viables, à cellule unique, et à éliminer tous les débris, les cellules mortes et les amas ou doublets. Normalement, les cellules mortes ont souvent un FSC plus faible et un SSC plus élevé que les cellules vivantes.

Une fois que les cellules cibles sont identifiées à l'aide du FSC et du SSC, elles peuvent être sélectionnées en fonction de leur fluorescence. S'il n'y a qu'un seul marqueur fluorescent, un histogramme univarié est affiché, tandis que si deux marqueurs différents sont utilisés, les graphiques sont normalement tracés sous forme d'histogramme bivarié (figure 1). Cela divise le graphique en quatre quadrants pour les quatre combinaisons possibles : double positif, simple positif pour chaque marqueur fluorescent, et négatif pour les deux.

Figure 1 : Histogramme bivarié