Le clonage par assemblage de brins Gibson

Le clonage par assemblage de brins Gibson est une technique de clonage qui ne repose pas sur des sites de restriction comme dans les techniques de clonage traditionnelles. Le clonage par assemblage de brins Gibson repose sur la présence de régions homologues aux extrémités des morceaux d'ADN.

Les trois enzymes exonucléase T5, Phusion ADN polymérase et Taq ADN ligase agissent toutes sur différentes parties des extrémités de l'ADN. Tout d'abord, l'exonucléase T5 ronge les extrémités 5', créant des dépassements complémentaires simple brin entre les deux insertions. Ces dépassements s'hybrident et la Phusion ADN polymérase insère les nucléotides manquants entre la séquence d'ADN double brin, en utilisant le dépassement homologue comme séquence d'amorçage. Une fois lancée, la réaction de Phusion est beaucoup plus rapide que celle de la nucléase lente et les espaces sont rapidement comblées. Dans la dernière étape, la ligase ferme la rupture de brin et fusionne les deux fragments d'ADN. Toutes ces enzymes sont actives à 50 ºC. Il est donc possible d'assembler plusieurs morceaux d'ADN dans un seul tube.

Le clonage par assemblage de brins Gibson est utilisé pour construire de grands circuits à partir de vecteurs de position.

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