La préparation des échantillons en microscopie optique

Au fur et à mesure de sa longue histoire et de ses nombreuses utilisations, la microscopie optique a donné naissance à d'innombrables techniques pour la préparation des échantillons. On peut simplement monter certains échantillons sur une lame de microscope.

Des étapes supplémentaires sont généralement indispensables pour obtenir des résultats satisfaisants. La majorité de ces méthodes provoquent la mort des cellules, c'est pourquoi la microscopie optique n'est pas idéale pour observer les phénomènes liés aux cellules vivantes. Les protocoles varient en fonction de l'échantillon et du microscope. Vous trouverez ci-dessous le processus général pour les préparations histologiques.

La préparation :

• La fixation - les fixateurs chimiques protègent les tissus en empêchant leur dégradation, et aident à maintenir la structure de la cellule et des composants sous-cellulaires. Le fixateur le plus connu pour la microscopie optique est le formol tamponné neutre à 10 %.

• La déshydratation - l'eau est éliminée de l'échantillon, car elle ne se mélange pas avec le milieu d'inclusion.

• L'inclusion - l'échantillon est plongé dans une matrice externe solide pour faciliter la coupe.

• La coupe - l'échantillon est coupé en fines tranches. L'épaisseur des tranches dépend de l'échantillon et de la question de recherche. Pour les travaux courants d'histologie, ces tranches ont une épaisseur de 2 à 5 micromètres.

• Le montage - fixation des échantillons sur la lame de microscopie.

• La coloration - l'échantillon est coloré pour ajouter du contraste et marquer les structures d'intérêt.