Le comptage manuel des cellules

Pour le comptage manuel des cellules, vous devez recourir à un hématimètre. Un hématimètre est une lame de microscope spécialement conçue pour permettre le comptage des cellules. La lame est dotée d'une cuvette en son milieu ; la zone de la cuvette est marquée par une grille. Une goutte de culture cellulaire est placée dans la cuvette. En observant l'échantillon au microscope, le chercheur utilise la grille pour compter manuellement le nombre de cellules dans une zone donnée. La profondeur de l'évier est prédéfinie. On peut ainsi calculer le nombre de cellules dans la culture comptée et, par conséquent, leur concentration.

Figure 1 : L'hématimètre manuel, montrant en détail la grille pour dénombrer les cellules.

Adoptez la procédure suivante :

• Faites la mise au point sur les lignes de la grille de l'hémocytomètre avec un objectif 10X.
• À l'aide d'un compteur manuel, comptez les cellules dans une série de 16 carrés. Lors du comptage, utilisez un système selon lequel les cellules ne sont comptées que lorsqu'elles se trouvent à l'intérieur d'un carré ou sur la ligne de démarcation droite ou inférieure.
• Déplacez l'hématimètre vers la série suivante de 16 carrés de coin et continuez à compter jusqu'à ce que les quatre séries de 16 coins soient comptées.
• Prenez le nombre moyen de cellules de chacun des ensembles de 16 carrés d'angle et multipliez-le par 10 000 (10⁴).
• Si vous diluez les cellules (en vous servant du milieu ou du bleu trypan), vous devez également multiplier par le facteur de dilution.
• La valeur finale est le nombre de cellules viables/ml dans la suspension cellulaire originale.