Le clonage moléculaire

Le clonage moléculaire désigne l'assemblage de molécules d'ADN dans un vecteur et la transformation ultérieure d'un organisme (souvent une bactérie ou une levure). Les méthodes de clonage moléculaire sont essentielles en biologie et en médecine. Le terme de clonage moléculaire comprend de nombreuses techniques différentes. Un flux typique de clonage moléculaire se présente comme suit :

1. L'isolation du gène d'intérêt

2. Le clonage du gène dans un vecteur

3. La transformation de l'organisme hôte avec la construction du vecteur

4. La sélection par résistance aux antibiotiques des cellules transformées

5. L'isolation des clones avec le même fond génétique

La confirmation de l'assemblage du plasmide peut être déterminée en effectuant un séquençage de l'ADN. Il est important de confirmer que les inserts ont été ligaturés avec succès dans un vecteur plasmidique avec la conformation et le cadre de lecture corrects. Le décalage de cadre peut provoquer des mutations non sens ou mal sens qui conduisent à l'expression de protéines non fonctionnelles.

• Les techniques de clonage