L'hybridation des acides nucléiques

L'hybridation des acides nucléiques est une technique permettant d'analyser l'ADN ou l'ARN d'un échantillon biologique. Elle peut être utilisée pour mesurer les niveaux d'expression ou le génotypage. L'hybridation des acides nucléiques repose sur la liaison spécifique (recuit) de deux molécules d'acide nucléique (ADN ou ARN) monocaténaire complémentaire. Dans l'ADN, la base adénine forme toujours une liaison avec la thymine, tandis que la guanine forme toujours une liaison avec la cytosine. Dans l'ARN, la thymine est remplacée par l'uranine pour former une paire de bases avec l'adénine.

Pour effectuer une analyse d'hybridation des acides nucléiques, l'ADN ou l'ARN est d'abord purifié à partir de l'échantillon. Les séquences d'acide nucléique double brin stables sont dénaturées et fragmentées pour former des brins simples courts, qui peuvent se lier à des oligonucléotides simple brin avec une séquence connue appelés sondes. L'ADN ou l'ARN non lié est éliminé par lavage et la liaison de l'ADN ou de l'ARN cible à la sonde est détectée par des marqueurs rapporteurs fluorescents, radioactifs ou chimioluminescents. Si nécessaire, l'ADN de l'échantillon peut être amplifié par PCR avant l'analyse (test d'hybridation de l'ADN amplifié).

Figure 1 : Hybridation des acides nucléiques : L'ADN ou l'ARN cible monocaténaire est ajouté aux sondes oligonucléotidiques (étape 1). L'ADN ou l'ARN cible se lie aux sondes complémentaires (étape 2). L'ADN ou l'ARN cible non lié est éliminé par lavage et la liaison complémentaire est détectée (étape 3).