L'analyse de la quantification et de la pureté
La concentration d'acide nucléique et la pureté peuvent être déterminées en mesurant leur absorbance à l'aide d'un spectrophotomètre. L'une des méthodes les plus courantes pour analyser l'isolement des acides nucléiques consiste à utiliser un spectrophotomètre. Le NanoDrop est un spectrophotomètre spécialisé qui peut mesurer l'absorbance à partir de seulement 0,5 à 2 μl d'échantillon. Il attire l'échantillon dans une colonne en exploitant la tension de surface (créant quelque chose comme une minuscule fibre optique de solution d'ADN) et mesure la lumière qui la traverse à différentes longueurs d'onde.
D'autres techniques doivent être utilisées pour déterminer l'intégrité ou le niveau de dégradation.
Figure 1 : Exemple de sortie d'une analyse spectrophotométrique de quantification de l'ARN d'un échantillon d'ARN de haute qualité.
De manière générale, un spectrophotomètre ou un NanoDrop estime automatiquement la concentration de votre échantillon à partir des données d'entrée. Il vous suffit d'indiquer la nature de votre échantillon (ARN, ADN ou protéines) et/ou la longueur d'onde que vous souhaitez mesurer. Pour une plus grande précision de vos résultats, il est recommandé d'effectuer plusieurs duplicatas de vos échantillons (si vous avez suffisamment de matériel) et de comparer les mesures de concentration obtenues.