Les vecteurs de position

Les vecteurs de position sont des vecteurs de destination spécialisés qui peuvent être utilisés efficacement pour le clonage par assemblage de brins Gibson de grands circuits génétiques. Chaque vecteur de position contient une séquence isolante de la chromatine, une cassette de recombinaison Gateway et une séquence de polyadénylation.

Ces motifs d'ADN sont flanqués par deux séquences nucléotidiques uniques (SNU) différentes, longues de 40 paires de bases. Les SNU sont flanquées à leur tour par deux sites de restriction I-SceI. Cette disposition des motifs d'ADN permet un assemblage rapide et reproductible de grands circuits génétiques.

Les vecteurs d'entrée avec les parties du circuit peuvent être assemblés dans le vecteur de position en utilisant le système de clonage Gateway. La digestion I-SceI du plasmide résultant donnera un fragment avec les parties du circuit et les motifs d'ADN mentionnés ci-dessus, flanqués des deux SNU. Ces fragments peuvent être utilisés immédiatement pour l'assemblage Gibson. L'unicité des SNU garantit l'assemblage spécifique d'un grand nombre de fragments différents.

Les étapes suivantes sont nécessaires pour assembler un grand circuit à partir de vecteurs de position :

• Produire des vecteurs d'entrée de toutes les parties du circuit.

• Le système de clonage Gateway des parties du circuit dans le vecteur de position.

• Les enzymes de restriction

• Le clonage par assemblage de brins Gibson des SNU complémentaires.