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L'expérience de troncation des protéines

Diagramme montrant les étapes d'un test de troncation des protéines. Tout d'abord, une hélice d'ADN double brin est représentée. La région d'ADN qui nous intéresse est soumise à une amplification par PCR pour garantir un nombre suffisant de copies. Ensuite, la transcription et la traduction in vitro ont lieu. Un brin d'ARN est représenté avec un codon de départ à l'extrémité 3'. Une protéine, représentée par une chaîne de points rouges, est assemblée pendant la traduction. Les protéines sont ensuite analysées par SDS-PAGE, un procédé qui utilise un courant électrique dans une matrice de gel pour séparer les protéines en fonction de leur poids moléculaire. Un exemple simple de résultats de SDS-PAGE est représenté, où les bandes dans un plateau de gel représentent les protéines. Une bande de protéine complète se trouve près du puits de chargement en haut du plateau, tandis qu'une bande de protéine tronquée se trouve plus loin.

Figure 1 : schéma montrant les différentes étapes du test de troncation des protéines.

Le test de troncation des protéines est composé de quatre étapes principales (Figure 1) :

  1. Isolement de l'acide nucléique ; soit de l'ADN génomique, soit de l'ARN total, soit de l'ARN poly A.
  2. Amplification d'une région spécifique du gène qui nous intéresse par PCR. À cette étape, un codon de départ (ATG) est ajouté à l'extrémité 5' de l'ADN amplifié.
  3. Transcription et traduction in vitro du produit.
  4. Détection de la protéine traduite à l'aide d'une électrophorèse sur gel de polyacrylamide.

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Le test de troncation des protéines