Les conditions de réaction des enzymes de restriction
La plupart des enzymes de restriction ont une température optimale de 37 °C et un pH optimal de 7,2 ou 8,5. Ces conditions d'environnement physique doivent être respectées pour que l'enzyme atteigne son activité maximale. Les températures d'incubation affectent considérablement l'activité des enzymes de restriction. L'enzyme peut se dénaturer en dehors de la plage de conditions physiques souhaitables. Les enzymes fonctionnent de manière très spécifique ; par conséquent, elles ne fonctionneront pas correctement si leur structure se détériore. Comme chaque enzyme de restriction est isolée de différentes bactéries et a des conditions de réaction optimales différentes, elles nécessitent des tampons spécifiques pour chaque réaction de restriction.
Tableau 1 : Activités enzymatiques. Le chiffre correspondant à chaque tampon indique l'activité de l'enzyme concernée. S'il y a un *, les enzymes peuvent présenter une activité étoile dans ce tampon.
Enzyme | Séquence | Tampon 1 | Tampon 2 | Tampon 3 | Temp. Incu. |
---|---|---|---|---|---|
EcoRI | G'AATTC | 25 | 100* | 50 | 37 °C |
KpnI | GGTAC'C | 100 | 75 | 10 | 37 °C |
PstI | CTGCA'G | 75 | 75 | 100 | 37 °C |
SpeI | A'CTAGT | 75 | 100 | 25 | 37 °C |
XbaI | T'CTAGA | 10 | 100 | 75 | 37 °C |
XhoI | C'TCGAG | 75 | 100 | 100 | 37 °C |