Préparation de la RT-qPCR

Lorsque l'ARN a été extrait de l'échantillon et soumis à une transcription inverse en ADNc, vous êtes prêt à quantifier les transcriptions avec la RT-qPCR.

Le transcrit ne peut être quantifié que par rapport à un gène de référence. Les gènes de référence sont généralement des gènes essentiels pour la cellule, car ils sont nécessaires aux fonctions cellulaires de base. Les gènes de référence sont censés être exprimés à des niveaux relativement constants dans la plupart des cellules d'un organisme dans des conditions normales et pathologiques.

Choisissez un gène de référence et concevez des paires d'amorces spécifiques pour votre cible et votre gène de référence.

Avant de commencer l'expérience de qPCR, vous devez produire des master mix pour chacune de vos paires d'amorces. Utilisez exactement la même concentration d'amorces et ajoutez le réactif qPCR.

Le réactif qPCR contient : - Du SYBR-Green, qui devient fluorescent lorsqu'il est lié à de l'ADN bicaténaire. - De l'ADN polymérase pour amplifier l'ADN.

Mélangez vos échantillons d'ADNc avec chaque master mix et lancez l'expérience qPCR.