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La chromatographie d'exclusion de taille

La chromatographie d'exclusion de taille est un type de chromatographie liquide dans lequel les molécules de l'échantillon sont séparées en fonction de leur taille.

La phase stationnaire est normalement un gel composé de billes poreuses sphériques avec une distribution granulométrique spécifique. En fonction de la taille des différentes molécules, celles-ci seront incluses ou exclues des pores à l'intérieur des billes. Les molécules incluses dans les pores resteront plus longtemps dans la phase stationnaire avant l'élution, tandis que les molécules exclues seront éluées plus rapidement car elles ne seront pas retenues dans la matrice. Par conséquent, les petites molécules seront éluées plus tardivement que les grandes (figure 1).

Principe de séparation des molécules en chromatographie d'exclusion de taille. Tout d'abord, un mélange d'échantillons composé de molécules sphèriques de tailles différentes - grosses rouges, moyennes vertes et petites bleues - est injecté dans la colonne remplie de grosses sphères grises - remplissage poreux. À mesure que le temps passe, les molécules traversent de haut en bas la colonne remplie, les grosses sphères rouges descendant plus vite que les petites. Tout d'abord, les gros solutés (sphères rouges) sont élués. Ensuite, les solutés moyens (sphères vertes) sont élués. Enfin, les petits solutés (sphères bleues) sont élués. Ces élutions sont représentées sur la courbe d'élution en dessous du diagramme. Trois pics sont visibles, le premier avec le plus petit temps de rétention pour les grosses sphères, le second avec un plus grand temps de rétention pour les sphères moyennes, et le dernier avec le plus grand temps de rétention pour les plus petites molécules.

Figure 1 : exemple de chromatographie d'exclusion de taille.

La résolution du chromatogramme dépend de quelques facteurs.