L'analyse par spectrophotométrie
L’approche de base de l’analyse par spectrophotométrie se présente comme suit :
1. La sélection de la longueur d’onde
La Loi de Beer-Lambert stipule que pour chaque longueur d’onde, l’absorbance est proportionnelle à la concentration. La longueur d’onde du maximum d’absorption est retenue pour un échantillon donné et utilisée pour mesurer l’absorbance.
2. La planification de la courbe d’étalonnage
Pour déterminer la concentration des analytes dans l’échantillon, il faut une courbe d’étalonnage. On élabore la courbe d’étalonnage en mesurant plusieurs concentrations pour obtenir un graphe linéaire. Les valeurs mesurées sont à la fois inférieures et supérieures à la concentration de l’analyte prévue dans l’échantillon lui-même.
Figure 1 : La courbe d’étalonnage.
3. La détermination de la concentration d’un échantillon inconnu
Une fois la courbe d’étalonnage établie, l’absorbance de toute solution inconnue peut être mesurée par la même longueur d’onde et sa concentration déterminée à l’aide du graphe ou calculée à partir de l’inclinaison.
Pour chaque mesure effectuée à l’aide du spectrophotomètre, il est important de faire un blanc. Le blanc de référence est une solution qui ne contient pas l’analyte en question.
Le blanc permet d’étalonner le spectrophotomètre et de fixer l’absorption du solvant à zéro. Cela permet de s’assurer que le résultat n’est lié qu’à l’analyte et non à un autre composé présent dans le solvant.
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