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L'analyse des microsatellites

L'un des moyens les plus courants d'obtenir un profil génétique consiste à effectuer une analyse des microsatellites (STR). Voici comment procéder :

  • 1) Isoler et purifier l'ADN d'un échantillon.
  • 2) Se servir la technique de la PCR pour amplifier les microsatellites. Un ensemble d'amorces placées sur les régions flanquantes d'une séquence variable amplifiera des fragments de différentes longueurs en fonction du nombre de répétitions (voir l'image ci-dessous). Il se peut que deux individus partagent le même nombre de répétitions sur un certain site répété. Si nous n'utilisions qu'un seul jeu d'amorces (amplifiant une seule région répétée), le risque qu'un individu partage le même nombre de répétitions avec un autre serait trop important. Par conséquent, un minimum de 13 sites de microsatellites sont étudiés pour établir l'empreinte génétique.

  • 3) Se servir de l'électrophorèse sur gel pour analyser la longueur des microsatellites et obtenir l'empreinte génétique.

Unités des microsatellites potentielles et longueurs des fragments de la région cible. Des brins d'ADN avec un nombre variable d'unités répétées sont représentés. Dans chaque brin, une amorce est située au début et à la fin des unités de microsatellites, de sorte que le fragment amplifié aura une taille différente selon le nombre de répétitions de l'unité. Dans l'exemple, 5 longueurs de fragment différentes sont représentées, correspondant à un nombre différent d'unités de microsatellites, de 7 à 11 unités. Les unités de microsatellites peuvent être constituées de différents nombres de nucléotides. Par exemple, une unité répétée de 2 nucléotides peut être constituée de C.A. répétés consécutivement. Le nombre d'unités répétées déterminera la taille du fragment et peut varier selon les individus. Les unités répétées peuvent également consister en 3, 4 ou même 5 nucléotides.