Analyse qPCR

Les résultats de la qPCR consistent en une courbe de fusion et un tracé d'amplification.

• La courbe de fusion indique à quelle température les brins d'ADN fondent/séparent. Elle est très utile pour évaluer si vous mesurez l'amplification de votre transcrit seul ou si vous avez des contaminants.

• Le graphique d'amplification représente le changement de fluorescence en tant que log (ΔRn) dans chaque cycle PCR.

Le cycle auquel la fluorescence franchit un seuil spécifié est appelé la valeur Ct (également appelée Cq pour cycle de quantification). Un Ct faible indique une quantité élevée de transcription initiale, car il n'a fallu que quelques cycles pour atteindre le seuil de fluorescence, et donc une expression élevée du gène étudié. Une valeur Ct élevée indique une faible quantité de transcrit initial, car il a fallu un grand nombre de cycles d'amplification pour atteindre le seuil de fluorescence, et donc une faible expression du gène.

Dans un premier temps, il faut vérifier si les contrôles négatifs produisent un signal. S'il y a un signal pour ces contrôles d'eau, l'expérience est contaminée par de l'ADN étranger et les résultats ne sont pas valables.

Il existe différentes méthodes pour calculer les quantités relatives de chaque ADN à partir de la fluorescence mesurée. La méthode la plus courante est la méthode delta-delta Ct.