La procédure de dissociation de la trypsine

La trypsine est une sérine protéase, présente dans le système digestif de nombreux vertébrés, où elle hydrolyse les protéines. Elle dissocie les chaînes peptidiques principalement sur le côté carboxyle des acides aminés lysine ou arginine, sauf lorsque l'un ou l'autre est suivi de proline. Dans le cadre de la culture cellulaire, la trypsine sert à briser les adhésions focales qui se fixent sur le récipient de culture cellulaire. Elle permet également de briser l'adhésion cellule-cellule par le biais de la cadhérine, afin de pouvoir récolter des cellules individuelles. Le mécanisme d'action de la trypsine est inhibé par les protéines sériques, le calcium et le magnésium. En outre, en présence du calcium, les cadhérines sont résistantes à la trypsine. Par conséquent, la plupart des solutions de trypsine contiennent également de l'EDTA qui agit comme agent chélateur du calcium. Nous devons également laver nos cellules en utilisant du PBS sans calcium et sans magnésium. Pour finir, il est important de ne pas incuber les cellules avec la trypsine plus de 2-5 minutes, car la trypsine peut être toxique pour les cellules après ce temps.

Jetez un coup d'œil à cette vidéo pour voir comment effectuer toutes les étapes nécessaires :

En principe, la solution de trypsine est d'origine animale et doit être conservée à -20 °C et préchauffée à 37 °C avant utilisation. Il est possible d'utiliser TrypLE^TM à la place de la trypsine. Ses composants sont sans trace d'origine animale et humaine et stables à température ambiante pendant au moins 6 mois. Ils ne sont pas inhibés par le sérum et ne nécessitent pas d'inactivateurs de trypsine.