Étape du transfert de western blot

Lors de l'étape du transfert de western blot, les protéines sont transférées du gel sur une membrane. Cette membrane est généralement constituée de nitrocellulose ou de difluorure de polyvinylidène (PVDF). Par rapport au PVDF, la nitrocellulose convient mieux aux protéines de faible poids moléculaire, elle est moins susceptible d'avoir un signal de fond (mais elle est aussi moins sensible) et elle se prête moins bien à l'élimination des anticorps et à leur réimpression avec des anticorps différents.

Comme dans l'électrophorèse sur gel des protéines, les protéines se déplacent de la cathode vers l'anode. Dans la procédure classique du western blot, le gel et la membrane sont empilés et placés dans une cuve remplie de tampon. Le gel et la membrane sont protégés par du papier filtre et des éponges et maintenus ensemble par une cassette de transfert. Comme les ions du tampon conduisent l'électricité, tous les composants de cette pile doivent être soigneusement immergés dans le tampon. Le gel et la membrane doivent également être en contact étroit l'un avec l'autre, sans bulles d'air. Pour éviter la surchauffe, un pack de glace est ajouté au réservoir. La cassette est généralement dotée d'un code couleur afin que l'utilisateur puisse s'assurer que le gel est orienté vers la cathode et la membrane vers l'anode. Pour plus d'informations sur les problèmes potentiels, consultez les résolutions des problèmes du western blot.

Il existe d'autres systèmes pour western blot qui sont légèrement différents de celui présenté dans cette simulation, mais ils sont tous basés sur les mêmes principes.