Ligazione

La ligazione è un processo che unisce in modo covalente l'ossatura di zucchero-fosfato del DNA a doppia elica. Viene eseguita da un enzima chiamato DNA ligasi.

La reazione di ligazione normalmente è composta da due passaggi:

• Collisione estremità DNA. Questa collisione avviene in modo casuale, e le probabilità che si verifichi sono estremamente ridotte a basse temperature. Le basse temperature stabilizzano il legame idrogeno tra i nucleotidi complementari. La DNA ligasi raggiunge l'attività ottimale a 25°C. Come regola generale, più bassa è la temperatura di incubazione, più lungo è il periodo di incubazione.

• Reazione enzimatica. La DNA ligasi catalizza l'unione dell'idrossile 3' al fosfato 5'.

Figura 1: Il nucleotide AMP viene trasferito al fosfato 5'. Poi il legame AMP-fosfato viene attaccato dall'OH 3' formando un legame covalente, mentre l'AMP viene rilasciato.