Definizione della tecnica FACS

L'ordinamento cellulare attivato dalla fluorescenza (FACS) è un tipo specializzato di citometria a flusso. Fornisce un metodo per ordinare una miscela eterogenea di cellule, una alla volta, in base alla diffusione della luce e alle caratteristiche fluorescenti specifiche di ciascuna cellula. Fornisce una registrazione rapida, obiettiva e quantitativa dei segnali fluorescenti da singole cellule, nonché la separazione fisica delle cellule di particolare interesse. Utilizzando la diffusione della luce, FACS può rilevare le dimensioni e la complessità delle cellule, mentre le caratteristiche di fluorescenza consentono ai ricercatori di analizzare diverse funzioni biologiche o studiare componenti cellulari specifici.

Come tecnica di citometria a flusso, la FACS si basa anche su tre sistemi principali: fluidico, ottico, ed elettronico. Il loro lavoro combinato consente il processo di smistamento delle cellule. Puoi dare uno sguardo a un diagramma di flusso che schematizza l'intera tecnica in Figura 1.

Figura 1. Diagramma di flusso schematico FACS. Il fluido guaina viene miscelato con il campione contenente le cellule nella camera di flusso, creando un flusso uniforme che intercetta una traiettoria del raggio laser generata dall'ottica con eccitazione del cosiddetto punto di interrogazione. La diffusione della luce generata e la fluorescenza emessa vengono rilevate dall'ottica di raccolta e inviate al software che gestisce l'apparecchiatura dal sistema elettronico che controlla come utilizzare le piastre di deflessione al fine di scartare quelle cellule non necessarie nei rifiuti o raccogliere le cellule di interesse.