Gating

Il gating è il processo di selezione delle cellule target da smistare applicando la carica corretta alle goccioline per inviarle alle provette di raccolta dopo essere passate dalle piastre di deflessione. I gating possono essere impostati in base ai valori di forward e side scatter o all'intensità di fluorescenza.

La prima e più comune strategia di gating consiste nell'utilizzare forward e side scatter per trovare eventi vitali nelle singole cellule ed eliminare eventuali detriti, cellule morte, e grumi o doublets. Normalmente, le cellule morte hanno spesso un forward scatter più basso e un side scatter più alto rispetto alle cellule vive.

Una volta identificate le cellule bersaglio usando forward e side scatter, esse possono essere ulteriormente selezionate in base alla loro fluorescenza. Se c'è solo un marcatore di fluorescenza viene visualizzato un istogramma univariato, mentre se vengono utilizzati due marcatori diversi i grafici sono normalmente tracciati come un istogramma bivariato (Figura 1). Questo divide il grafico in quattro quadranti per le quattro possibili combinazioni: doppio positivo, singolo positivo per ciascun marcatore fluorescente e negativo per entrambi.

Figura 1. Istogramma bivariato.