Misurazione del segnale FACS

L'apparecchiatura FACS può misurare la quantità di fluorescenza emessa dalle cellule dopo che i fluorofori presenti o attaccati ad esse sono stati eccitati dal raggio laser. Inoltre, misura anche la luce diffusa dalle cellule quando passano attraverso il raggio laser. Ci sono due diverse modalità di diffusione della luce (Figura 1):

• Forward scatter o dispersione frontale (FSC): è una misurazione della luce per lo più diffratta e viene rilevata da un fotodiodo posto di fronte alla sorgente luminosa, appena fuori dall'asse del raggio laser incidente. Fornisce la dimensione della cellula, ed è un metodo adatto a rilevare particelle maggiori di una data dimensione indipendentemente dalla loro fluorescenza.

• Side scatter o dispersione laterale (SSC): è una misurazione della luce principalmente rifratta e riflessa che si verifica in qualsiasi interfaccia all'interno della cella dove c'è un cambiamento di indice di rifrazione (Figura 3-1). Questa misurazione viene captata da una lente di rilevazione posta a circa 90 gradi rispetto al raggio laser e poi reindirizzata da un divisore di fascio al rivelatore appropriato. È proporzionale alla granularità delle cellule o alla complessità interna.

Figura 1. Diffusione della luce rilevata dalle apparecchiature FACS.