Conteggio manuale delle cellule

Per contare le cellule manualmente è necessario utilizzare un emocitometro. Un emocitometro è un vetrino portaoggetti per microscopio appositamente progettato per effettuare la conta delle cellule. Il vetrino ha un incavo al centro, contrassegnato da una griglia. Nell'incavo viene posta una goccia della coltura cellulare da analizzare. Osservando il campione al microscopio, il ricercatore utilizza la griglia per contare manualmente il numero di cellule in una determinata area. La profondità dell'incavo è predefinita. È quindi possibile calcolare il volume della coltura sottoposta a conteggio e, con esso, la concentrazione delle cellule.

Figura 1: Emocitometro manuale; viene mostrata nel dettaglio la griglia per contare le cellule.

Ecco la procedura da seguire:

• Mettere a fuoco le linee della griglia dell'emocitometro con un ingrandimento di 10X.
• Utilizzando un contatore manuale, contare le cellule presenti in una serie di 16 quadrati. Durante il conteggio, adottare un sistema in base al quale le cellule vengono contate solo quando si trovano all'interno di un quadrato o sulla linea di delimitazione, a destra oppure in basso.
• Passare alla serie successiva di 16 quadrati dell'emocitometro e contare le cellule, fino a esaminare tutte e quattro le serie di 16 quadrati.
• Moltiplicare per 10.000 (10⁴) il numero medio di cellule nelle serie di 16 quadrati.
• Se si diluiscono le cellule (usando terreni o blu Trypan) è necessario moltiplicare il valore di cui sopra anche per il fattore di diluizione.
• Il risultato finale è il numero di cellule vitali/mL nella sospensione cellulare di partenza.