Ibridazione degli acidi nucleici

L'ibridazione degli acidi nucleici è una tecnica per analizzare il DNA o l'RNA di un campione biologico. Può essere usata per misurare i livelli di espressione o la genotipizzazione. L'ibridazione degli acidi nucleici si basa sul legame specifico (annealing) di due molecole di acido nucleico (DNA o RNA) a singolo filamento complementari. Nel DNA la base adenina forma sempre un legame con la timina, mentre la guanina forma sempre un legame con la citosina. Nell'RNA la timina è sostituita dall'uranina per formare una coppia di basi con l'adenina.

Per eseguire l'analisi di ibridazione dell'acido nucleico, il DNA o l'RNA viene prima purificato dal campione. Le sequenze stabili di acido nucleico a doppio filamento vengono denaturate e frammentate per formare corti filamenti singoli, che possono legarsi a filamenti singoli di oligonucleotidi con una sequenza nota chiamati sonde. Il DNA o RNA non legato viene lavato via e il legame del DNA o RNA bersaglio alla sonda viene rilevato da etichette reporter fluorescenti, radioattive o chemiluminescenti. Se necessario, il campione di DNA può essere amplificato mediante PCR prima dell'analisi (test di ibridazione del DNA amplificato).

Figura 1: Ibridazione dell'acido nucleico: il DNA o RNA bersaglio a singolo filamento viene aggiunto alle sonde oligonucleotidiche (step 1). Il DNA o RNA bersaglio si lega alle sonde complementari (step 2). Il DNA o RNA target non legato viene lavato via e viene rilevato il legame complementare (step 3).