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Esperimento di troncamento delle proteine

Immagine che mostra le fasi di un test di troncamento delle proteine. In primo luogo, viene mostrata un'elica di DNA a doppio filamento. La regione di DNA in questione viene sottoposta ad amplificazione tramite PCR per ottenere un numero sufficiente di copie. Successivamente, avvengono la trascrizione e la traduzione in vitro. Viene mostrato un filamento di RNA con un codone di inizio all'estremità 3'. La proteina, rappresentata da una serie di punti rossi, viene assemblata durante la traduzione. Le proteine vengono poi analizzate usando l'SDS-PAGE, un processo che utilizza la corrente elettrica in una matrice in gel per separare le proteine in base al loro peso molecolare. È raffigurato un esempio di risultati dell' SDS-PAGE, in cui le bande in una matrice in gel rappresentano le proteine. Si può vedere una banda proteica completa vicino al pozzetto nella parte superiore del vassoio, mentre la banda di una proteina troncata viene raffigurata come se avesse viaggiato più in basso nel vassoio.

Figura 1. Figura che mostra le diverse fasi del test di troncamento delle proteine.

Il test di troncamento delle proteine è composto da quattro fasi principali (Figura 1):

  1. Isolamento dell'acido nucleico: DNA genomico, RNA totale o poli(A).
  2. Amplificazione di una regione specifica del gene di interesse usando la PCR. In questa fase, un codone di inizio (ATG) viene aggiunto all'estremità 5' del DNA amplificato.
  3. Trascrizione e traduzione in vitro del prodotto.
  4. Rilevamento della proteina tradotta mediante elettroforesi su gel di poliacrilammide (SDS PAGE).

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Il test di troncamento delle proteine