Clonazione con enzimi di restrizione

La clonazione molecolare basata su enzimi di restrizione è il metodo di clonazione "classico" ed è ancora una delle tecniche più diffuse. In linea di principio, l'assemblaggio del plasmide comporta i seguenti passi:

• Digestione per restrizione: Il plasmide vettore circolare chiuso e il frammento di gene di interesse sono scissi con uno o più enzimi di restrizione.

• Ligazione: I frammenti di DNA con overhang compatibili sono legati in un plasmide vettore plasmidico linearizzato.

I tassi di successo più elevati si ottengono quando si usano frammenti di DNA con estremità 5' o 3' coesive/sporgenti invece che assemblare frammenti di DNA con estremità tronche.

• L'assemblaggio 3A è un metodo usato per assemblare in modo efficiente due BioBrick.