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Cromatografia di esclusione molecolare

La cromatografia di esclusione molecolare è un tipo di cromatografia liquida in cui le molecole nel campione sono separate in base alla loro dimensione.

La fase stazionaria è normalmente un gel composto da perline porose sferiche con una distribuzione dimensionale specifica. A seconda delle dimensioni delle diverse molecole, esse verranno incluse o escluse dai pori all'interno delle perle. Quelle incluse nei pori rimarranno più a lungo nella fase stazionaria prima di eluire, mentre quelle escluse eluiranno più rapidamente in quanto non verranno trattenute all'interno della matrice. Pertanto, le molecole più piccole eluiranno più tardi di quelle più grandi (Figura 1).

Principio delle molecole di separazione nella cromatografia di esclusione molecolare. Innanzitutto, una miscela campione costituita da molecole di diverse dimensioni (grandi sfere rosse, verdi medie e piccole blu) viene iniettata nella colonna riempita con grandi sfere grigie (imballaggio poroso). Col passare del tempo, le molecole viaggeranno attraverso la colonna dall'alto verso il basso e le grandi sfere rosse scenderanno più velocemente di quelle più piccole. Verranno eluiti i primi grandi soluti, le sfere rosse. Quindi, verranno eluiti i soluti medi, le sfere verdi. Infine, verranno eluiti i piccoli soluti, le sfere blu. Tali eluizioni sono rappresentate sulla curva di eluizione sotto il diagramma. Sono visibili tre picchi, il primo picco, con il minor tempo di ritenzione, per le sfere grandi, il secondo, con il tempo di ritenzione intermedio, per le sfere medie, e l'ultimo con il tempo di ritenzione maggiore, per le molecole più piccole.

Figura 1. Esempio di cromatografia di esclusione molecolare.

La risoluzione del cromatogramma dipende da diversi fattori.