Diffusione

La diffusione si riferisce a un metodo per distribuire i microrganismi in modo uniforme sulla superficie di una piastra di agar. Un piccolo volume di coltura microbica viene spalmato uniformemente sulla superficie dell'agar utilizzando un diffusore sterile.

Ci sono molte tecniche diverse per la diffusione. Alcune tecniche usano perline di vetro sterili che possono essere fatte rotolare sulla superficie dell'agar per distribuire le cellule. Spesso si usano strumenti specializzati chiamati spreader. L'immagine qui sotto mostra uno spreader di plastica monouso e uno spreader di metallo riutilizzabile.

La seguente è una panoramica della procedura di spalmatura con uno spreader di vetro riutilizzabile:

• Uno spreader di vetro dovrebbe essere sterilizzato usando una fiamma di un becco di Bunsen. In primo luogo, immergere lo spargitore di vetro in alcool (70% etanolo), scuotere l'alcool in eccesso e incendiare il residuo. Poi, lasciate raffreddare lo spreader.
• Distribuire la coltura microbica in modo uniforme sulla superficie della piastra di coltura. La pressione dovrebbe essere applicata uniformemente mentre il vetro si sparge lungo la superficie del terreno di coltura.
• Lasciare che la cultura microbica venga assorbita dalla piastra di coltura.
• Incubare la piastra a testa in giù per evitare la formazione di gocce d'acqua (condensa) sulla piastra.

La diffusione è usata per isolare singole cellule di colture altamente diluite, come le cellule trasformate dopo la clonazione. Dopo aver sparso le cellule sulla piastra di agar, ogni cellula produrrà colonie di cloni. Se la soluzione cellulare contiene troppe cellule, non è possibile isolare singole colonie. In questo caso, è meglio utilizzare il metodo della striatura per isolare colonie singole.

È importante scegliere una singola colonia per isolare cloni genetici puri. Una colonia è un gruppo di cellule che hanno origine dalla stessa fonte; quindi, tutte le cellule di una singola colonia contengono informazioni genetiche identiche.