Tipi di ELISA

Tutti gli ELISA si basano sull'interazione specifica o sull'anticorpo e sull'antigene. Esistono numerose varianti del metodo ELISA. Di seguito sono elencati i tipi ELISA più comuni:

ELISA diretto

• Vantaggi

  • Più veloce perché utilizza un solo anticorpo
  • Elimina la reattività crociata tra anticorpi.

• Svantaggi

  • Poco flessibile e costoso: l'anticorpo primario deve essere marcato individualmente e non può essere utilizzato per esperimenti multipli
  • Il segnale è meno amplificato.

• Quando viene generalmente utilizzato: Analisi della risposta immunitaria a un antigene.

ELISA indiretto

• Vantaggi

  • Alta sensibilità: l'anticorpo primario ha diversi epitopi che possono essere legati a più anticorpi secondari marcati, che amplificano il segnale.
  • Flessibile: diversi anticorpi di rilevamento primario possono essere utilizzati con un singolo anticorpo secondario marcato.
  • Sono disponibili in commercio numerose varianti di anticorpi secondari marcati.

• Svantaggi

  • Potrebbe verificarsi una reattività crociata con l'anticorpo secondario.
  • Ha bisogno di ulteriori passaggi di incubazione.

Figura 1: Tipi di ELISA

• Quando viene generalmente utilizzato: Determinazione della concentrazione anticorpale totale nei campioni.

ELISA a sandwich

• Vantaggi

  • Sensibilità molto alta: Vengono utilizzati due anticorpi in modo che l'antigene venga catturato e rilevato in modo specifico. L'antigene non richiede purificazione prima della misurazione
  • Flessibilità: È possibile utilizzare il rilevamento diretto e indiretto.

• Svantaggi

  • È necessaria una coppia abbinata: L'ottimizzazione della combinazione di anticorpi può essere difficile. Ciascun anticorpo deve reagire con un epitopo specifico sulla proteina bersaglio e non può reagire in modo incrociato con l'anticorpo abbinato.
• Quando viene generalmente utilizzato: Analisi di campioni complessi. Non è necessario purificare l'antigene prima di utilizzare questo metodo.

ELISA competitivo

• Vantaggi

  • Sensibilità alta: può rilevare specificamente antigeni in quantità relativamente piccole.
  • Non richiede l'elaborazione del campione.
  • Maggiore precisione, accuratezza e riproducibilità.

• Svantaggi

  • Falsi positivi: specificità bassa.

• Quando viene generalmente utilizzato: Rilevamento di piccoli antigeni che non possono essere legati a due diversi anticorpi come nella tecnica ELISA a sandwich. Questo metodo ELISA è comunemente usato quando è disponibile un solo anticorpo per l'antigene.