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Protein-Gelelektrophorese

Die Protein-Gelelektrophorese ist eine Technik, um Proteine nach ihrer Größe zu trennen. Bei der Probenvorbereitung werden die Proteine denaturiert und durch das SDS mit einer negativen Ladung versehen. Die Denaturierung beseitigt die Faltung und macht alle Proteine zu linearen Molekülen. Die negative Ladung bedeutet, dass die Proteine vom negativen Pol (Kathode) an der Oberseite des Gels in Richtung des positiven Pols (Anode) an der Unterseite wandern. Das Gel funktioniert wie ein Molekularsieb. Kleine Proteine wandern leichter durch es hindurch als große Proteine. Daher legen kleine Proteine während der Laufzeit des Experiments eine größere Strecke zurück und werden am Boden des Gels gefunden.

Die Ergebnisse der Gelelektrophorese werden als rosafarbene Banden dargestellt, die sich über das Gel verteilen. Die erste Spalte auf der rechten Seite mit 6 Banden, die sich von oben nach unten im Gel erstrecken, wird als Marker bezeichnet, auch bekannt als Leiter. Der Rest der Spalten mit wenigen Banden in jeder Spalte repräsentiert die Proben. Die rosafarbenen Banden sind als abgetrennte Proteinfragmente markiert, ihre Positionen im Gel können mit der Leiter verglichen werden, um ihre Größe zu bestimmen.

Abbildung 1: Ein abgeschlossenes Gelelektrophorese-Experiment mit 5 Proben und der Proteinleiter auf der rechten Seite. Die Proteinleiter kann verwendet werden, um die Größe der Banden in den Proben abzuschätzen.

Nach der Elektrophorese erscheinen die verschiedenen Proteine in der Probe als Banden in bestimmten Abständen von der Oberseite des Gels auf Basis ihrer Größe. Die Größe der Proteinbanden kann durch den Vergleich des Abstands mit den Molekulargewichts-Standardproben (auch Leiter genannt) geschätzt werden.