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Les étapes de la coloration de Gram

  1. Appliquez le cristal violet sur la lamelle et maintenez-la pendant 60 secondes. Lavez la lamelle avec de l'eau.

  2. Appliquez l'iode sur la lamelle et maintenez-la pendant 60 secondes. Lavez la lamelle avec de l'eau.

  3. Appliquez de l'alcool éthylique 95 % sur la lamelle et maintenez-la pendant 5 à 10 secondes. Lavez la lamelle avec de l'eau.

  4. Enfin, appliquez de la safranine sur la lamelle et maintenez-la pendant 45 secondes. Lavez la lamelle avec de l'eau.

Quatre étapes de l'expérience de coloration de Gram. Dans la première étape, le contenu de la bouteille contenant une substance violette, appelée cristal violet, est versé sur la lame de verre et y est laissé pendant 60 secondes. Ainsi, les structures sphériques et en forme de bâtonnets à l'intérieur du cercle, représentant la vue microscopique des bactéries sur la lame de verre, sont colorées en violet. Dans la deuxième étape, le contenu de la bouteille contenant une substance orange, appelée iode, est versé sur la lame de verre et y reste pendant 60 secondes. En conséquence, les bactéries observées au microscope restent violettes. Dans la troisième étape, le contenu de la bouteille contenant une substance bleu clair, appelée alcool éthylique à 95 %, est versé sur la lame de verre et y reste pendant 5 à 10 secondes. Ainsi, les bactéries en forme de bâtonnets visibles au microscope sont décolorées, tandis que les bactéries sphériques restent violettes. Dans la dernière étape, le contenu de la bouteille contenant une substance rose, appelée safranine, est versé sur la lame de verre et y reste pendant 45 secondes. En conséquence, les bactéries en forme de bâtonnets observées au microscope se colorent en rose, tandis que les bactéries sphériques restent violettes. Les bactéries en forme de bâtonnets sont dites gram-négatives et les sphériques sont dites gram-positives

Figure 1 : Les étapes de la méthode de coloration de Gram