Arten von ELISA-Tests

Alle ELISA-Tests beruhen auf der spezifischen Wechselwirkung von Antikörper und Antigen. Es gibt zahlreiche Varianten der ELISA-Methode. Im Folgenden sind die gängigsten ELISA-Tests aufgeführt:

Direkter ELISA-Test

• Vorteile

  • Schneller weil nur ein Antikörper verwendet wird
  • Keine Kreuzreaktionen zwischen Antikörpern

• Nachteile

  • Unflexibel und kostspielig: der Primärantikörper muss einzeln markiert und kann nicht für mehrere Versuche verwendet werden
  • Das Signal wird weniger stark verstärkt

• Übliche Anwendungsfälle: Analyse der Immunantwort auf ein Antigen

Indirekter ELISA-Test

• Vorteile

  • Hohe Sensitivität: der Primärantikörper hat mehrere Epitope, die von mehreren markierten Sekundärantikörpern gebunden werden können, die das Signal verstärken
  • Flexibel: Verschiedene primäre Detektionsantikörper können mit einem einzigen markierten Sekundärantikörper verwendet werden
  • Zahlreiche Varianten markierter Sekundärantikörper sind im Handel erhältlich

• Nachteile

  • Mögliche Kreuzreaktion mit dem Sekundärantikörper
  • Zusätzliche Inkubationsschritte erforderlich

Abbildung 1: Arten von ELISA-Tests

• Übliche Anwendungsfälle: Bestimmung der Gesamtantikörperkonzentration in Proben

Sandwich-ELISA

• Vorteile

  • Sehr hohe Sensitivität: Es werden zwei Antikörper verwendet, sodass das Antigen spezifisch eingefangen und nachgewiesen wird. Das Antigen muss vor der Messung nicht gereinigt werden
  • Flexibilität: Sowohl indirekte als auch direkte Detektion möglich

• Nachteile

  • Ein abgestimmtes Paar ist erforderlich: Die Optimierung von Antikörperkombinationen kann schwierig sein. Jeder Antikörper muss mit einem spezifischen Epitop auf dem Zielprotein reagieren und darf nicht mit seinem Partnerantikörper kreuzreagieren.

• Übliche Anwendungsfälle: Analyse komplexer Proben. Das Antigen muss vor der Anwendung dieser Methode nicht gereinigt werden.

Kompetitiver ELISA-Test

• Vorteile

  • Hohe Sensitivität: gezielter Nachweis von Antigenen in relativ geringen Mengen
  • Keine Probenverarbeitung erforderlich
  • Höhere Präzision, Genauigkeit und Reproduzierbarkeit

• Nachteile

  • Falsch-positiv: geringe Spezifität

• Übliche Anwendungsfälle: Nachweis kleiner Antigene, die nicht von zwei verschiedenen Antikörpern gebunden werden können, wie beim Sandwich-ELISA. Dieser ELISA-Test wird häufig verwendet, wenn nur ein Antikörper für das Antigen verfügbar ist.