Quantifizierung und Reinheitsanalyse
Nukleinsäurekonzentration und -reinheit können durch Messung der Absorption mit dem Spektralphotometer bestimmt werden. Eine der geläufigsten Methoden zur Analyse der Nukleinsäure ist die Verwendung eines Spektralphotometers. Der NanoDrop ist ein spezialisiertes Spektralphotometer, das die Absorption von nur 0,5-2 μl Probe messen kann. Er zieht die Probe in eine Art Säule, indem er die Oberflächenspannung ausnutzt (es entsteht so etwas wie eine winzige Glasfaser aus DNA-Lösung), und misst dann das Licht, das bei verschiedenen Wellenlängen durch die Probe hindurchgeht.
Andere Techniken werden benötigt, um die Integrität oder die Degradierung der Nukleinsäure zu bestimmen.
Abbildung 1: Beispiel einer photometrischen Quantifizierung einer hochqualitativen RNA-Probe
Normalerweise wird ein Spektralphotometer oder ein NanoDrop automatisch die Konzentration deiner Probe bestimmen - dafür müsstest du angeben, um welche Art von Probe es sich dabei handelt (RNA, DNA oder Protein) und/oder mit welcher Wellenlänge du die Probe messen möchtest. Um dir der Ergebnisse sicher sein zu können, wird empfohlen, mehrere Duplikate deiner Proben zu messen (wenn du dafür genügend Material zur Verfügung hast) und die resultierenden Konzentrationen miteinander zu vergleichen.