Restriktionsenzym-Klonierung

Die auf Restriktionsenzymen basierende molekulare Klonierung ist die „klassische“ Klonierungsmethode und immer noch eine der beliebtesten Techniken. Im Prinzip umfasst der Aufbau eines Plasmids die folgenden Schritte:

• Restriktionsverdau: Geschlossenes zirkuläres Vektorplasmid und Fragment des fraglichen Gens werden mit einem oder mehreren Restriktionsenzymen gespalten.

• Ligation: DNA-Fragmente mit kompatiblen Überhängen werden in ein linearisiertes Vektorplasmid ligiert.

Höhere Erfolgsquoten werden erzielt, wenn DNA-Fragmente mit 5'- oder 3'-klebrigen/überhängenden Enden verwendet werden, anstatt DNA-Fragmente mit stumpfen Enden zu assemblieren.

• 3A-Zusammenbau ist eine Methode zum effizienten Zusammenbau zweier BioBricks.