Experimento de PCR

Para preparar miles de millones de copias de ADN, se llevan a cabo múltiples ciclos repetidos de síntesis de ADN en un tubo de PCR. Cada ciclo incluye tres pasos diferentes, definidos en función de la temperatura (ver la figura que aparece más adelante):

1. Paso de desnaturalización (95 ºC): A estas altas temperaturas, el hidrógeno se une y se mantiene junto, y las dos cadenas de ADN se separan y se desintegran. El ADN molde monocatenario ahora está disponible para poder realizar la copia.
2. Paso de hibridación (5-10 ºC por debajo del cebador con Tm menor): A temperatura de hibridación, pequeñas porciones de ADN, llamadas cebadores, se unen a sitios complementarios del ADN molde. Los cebadores definen la secuencia diana, la región específica del ADN que va a copiarse. La temperatura de hibridación se calcula a partir de la composición del cebador (el número de nucleótidos, así como el número de guaninas y citosinas). Por lo general, se debe calcular la temperatura de hibridación óptima para cada cebador.
3. Paso de extensión (72 ºC): A 72 ºC, una enzima llamada ADN polimerasa se encarga de copiar el ADN. Esta reconoce el extremo 3′ de un cebador unido a una cadena molde y comienza a copiar el ADN molde. En este caso, es una polimerasa termoestable, ya que para ser funcional, debe estar activa a altas temperaturas.

Todos los ciclos se llevan a cabo sin intervención en una máquina de PCR, que puede cambiar automáticamente la temperatura después de cada paso. Al final de un ciclo, partes de la cadena inicial de ADN se multiplican por dos. Al final de, por ejemplo, 30 ciclos (que es lo más frecuente a la hora de realizar una PCR) habrá al menos mil millones de copias (2³⁰) de la secuencia diana en el tubo.

Experimento de PCR. La PCR consta de tres pasos: 1. Desnaturalización, 2. Hibridación y 3. Elongación. Los pasos se repiten muchas veces (con frecuencia, 30), lo que produce miles de millones de copias de ADN de regiones específicas.